Baixe Teste Simplificado para Detecção de Coliformes no Leite Humano: Norma da Rede de Leite e outras Notas de aula em PDF para Cultura, somente na Docsity!
NOV 2011 BLH-IFF/NT- 40.
Teste Simplificado para
Rede Nacional deBancos de Leite Detecção de Coliformes Totais
Humano PNQBLH – ProgramaNacional de Qualidade em Bancos de LeiteHumano
Sede:FIOCRUZ/IFF-BLH Av. Rui Barbosa, 716 –Flamengo Rio de JaneiroRJ 20.550-020 CEP:
OrigemCentro de Referência Nacional para Bancos de Leite Humano – Instituto Fernandes Figueira / Fundação OswaldoCruz / Ministério da Saúde AutoresJoão Aprígio Guerra de Almeida; Franz Reis Novak e
Tel/fax: (021) 2553-9662 Vander Guimarães www.redeblh.fiocruz.br Palavras-Chave: Bactérias. Banco de Leite Humano.Coliformes. Qualidade. (^) 8 páginas
SUMÁRIO
- Objetivo
- Documentos Complementares
- Aparelhagem
- Fundamentos
- Execução do Ensaio
- Resultados ANEXO I – Formulário para Registro Diário de Não-conformidades
ANEXO II – Formulário para Registro Mensal de Não-conformidades
1. Objetivo Esta Norma prescreve o método para determinação de bactérias coliformes totais no leite humano ordenhado pasteurizado, com o objetivo de garantir a qualidade,sob o ponto de vista microbiológico, do alimento distribuído pelos Bancos de Leite Humano. 2. Documentos Complementares Na elaboração desta Norma foram consultados: MB-3463:1991. Bactérias coliformes totais, coliformes fecais e Escherichia coli em alimentos – Determinação do número mais provável. Novak, F. R. & Almeida, J. A. G., 2002. Teste alternativo para a detecção de coliformes em leite humano. Jornal de Pediatria, 78:587-591. RDCHumano. DOU – 04/09/206. 171. Normas para Implantação e Funcionamento de Bancos de Leite
Programa Nacional de Qualidade em Bancos de Leite Humano – Manual doParticipante. Fundação Oswaldo Cruz – Instituto Fernandes Figueira – Rio de Janeiro. 2002
3. Fundamentos 3.1. Quadro Teórico O referencial teórico que confere sustentação técnico-científica aos fundamentosque compõem esta Norma foi extraído das seguintes fontes:
ALMEIDA, J. A. G., 1986. Qualidade do Leite Humano Coletado e Processado emBancos de Leite. Dissertação de Mestrado, Viçosa: Faculdade de Engenharia de Alimentos, Universidade Federal de Viçosa. ALMEIDA,microbiana J.(filmevídeo). A. G., 1992. 1 cassete Fatores VHS, de Defesa 34 minutos, do Leite color., Humano: sonoro. EcologiaRio de Janeiro: Núcleo de Vídeo – CICT/Fundação Oswaldo Cruz. ALMEIDA, J. A. G., 1992. O Leite Humano: aspectos relativos à composição (filme-vídeo). 1 cassete VHS, 34 minutos, color., sonoro. Rio de Janeiro: Núcleode Vídeo – CICT/Fundação Oswaldo Cruz.
NOVAK, F. R. & ALMEIDA, J. A. G., 2002. Teste alternativo para a detecção decoliformes em leite humano. Jornal de Pediatria, 78:587-591.
i. Béquer para preparo de meio de cultura; j. Tubo de ensaio; k. Frasco de Erlenmeyer l. Estante para suporte, revestida em PVC m. Gelo ou gelo reciclável n. Caixas isotérmicas revestidas em PVC
5. Execução do Ensaio 5.1. Materiais e reagentes Caldo Verde Bile Brilhante 2% Lactose Água destilada ou deionizada 5.2. Procedimento 5.2.1. Preparo dos meios de cultura e reagentes 5.2.1.1. Preparo de Caldo Verde Bile Brilhante – Concentrado (5% p/v). Pesar 50g do meio de cultura descrito em materiais e reagentes e adicionar a 1 litro de águadestilada ou deionizada.
Agitar até dissolução completa. Distribuir 10mL do meio de cultura já preparado em tubos indicados para culturamicrobiológica com capacidade mínima de 15mL e colocar os tubos de Durhan invertidos no interior, juntamente com o meio de cultura. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos, em autoclave. Após resfriamento identificar os lotes de tubos com nome do meio, concentração e prazo de validade. Os tubos com meio de cultura poderão ser mantidos sob refrigeração a 5ºC,conforme capítulo “Cadeia de Frio”, por até 15 dias.
Certificar-se imediatamente antes de cada utilização que os tubos de Durhanestão completamente imersos no meio de cultura e livres de bolhas de ar em seu interior.
5.2.1.2. Preparo de Caldo Verde Bile Brilhante – Simples (4% p/v) Pesar 40g do meio de cultura descrito em 4.1 e adicionar a 1 litro de água destilada ou deionizada. Agitar até dissolução completa. A seguir, distribuir 9mL do meio de cultura em tubos indicados para cultura microbiológica com capacidade mínima de 15mL e adicionar os tubos de Durham invertidos. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos, em autoclave. Após resfriamento identificar os lotes de tubos com nome do meio, concentração e prazo de validade. Os tubos com meio de cultura poderão ser mantidos sobrefrigeração a 5ºC, conforme capítulo “Cadeia de Frio”, por até 15 dias.
Certificar-se imediatamente antes de cada utilização que os tubos de Durhanestão completamente imersos no meio de cultura e livres de bolhas de ar em seu interior. 5.2.2. Validação da esterilização do meio de cultura Após a esterilização, os tubos contendo meio de cultura deverão ser submetidos a testes de validação. Para tanto, 10% de cada lote esterilizado deve ser incubado atemperatura de 37ºC por 24horas. A formação de gás ou turvação do meio em um único tubo desqualifica o lote produzido. 5.2.3. Coleta de material para análise Após o tratamento térmico (pasteurização), coletar 4 alíquotas de 1ml da amostra a ser analisada. As alíquotas deverão ser coletadas em pontos diferentes dofrasco.
Semear todas alíquotas de uma mesma amostra em um único tubo de cultura contendo Caldo Verde Bile Brilhante concentrado. O procedimento deverá serconduzido com rigor microbiológico, utilizando ambiente estéril, ou campo de chama durante todo o procedimento. Tampar os tubos contendo o leite com o meio de cultura e incubá-los a 36 ± 1ºC durante 24 a 48 horas, em estufa.
5.2.4 Cuidados com a amostra Cada tubo que receber a amostra deve conter o número do frasco do qual o leitefoi extraído. O acondicionamento e o transporte das amostras com o produto para análise deverão ser em caixas isotérmicas mantendo-se as mesmas condições deCadeia de Frio preconizadas para o LHO.
FORMULÁRIO PARA REGISTRO DIÁRIO DE RESULTADOSBLH-IFF/NT- 40.11 – ANEXO I PESQUISA DE COLIFORMES TOTAIS Data (^) AnalisadasAmostras Presença Ausência Número (%) Número (%)
Total
FORMULÁRIO PARA REGISTRO MENSAL DE NÃO CONFORMIDADESBLH-IFF/NT- 40.11 – ANEXO II Mês: ____________ Ano: ____________
Analisadas^ Amostras NúmeroPresença (%) NúmeroAusência (%)
