Técnica de Imunodifusão, Exercícios de Metodologia

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Técnica de Imunodifusão para a

Detecção de Anticorpos

Precipitantes contra Antígenos

Solúveis

Prof. Helio José Montassier

• Termo utilizado para designar testes sorológicos

realizados em meio gelificado, no qual os reagentes

(Ag e Ac) se misturam por difusão

• Difusão simples em uma dimensão – Oudin
• Difusão dupla em duas dimensões – Ouchterlony.

INTRODUÇÃO

- A IDGA Permite também revelar se duas ou mais substâncias

são imunologicamente idênticas ou independentes.

- Essa técnica geralmente é feita sobre lâminas de microscopia

ou placas de Petri, revestida com uma camada de gel de ágar

de 0,6 a 1,5% em solução fisiológica ou tamponada.

INTRODUÇÃO

Fig. – Fenômeno da Imunoprecipitação – Importância da Equivalência entre as Concentrações de Ag e Ac para ocorrer a Soroprecipitação e a maior formação de imunecomplexos precipitáveis.

Passos básicos para a realização de IDGA (2)

Passos básicos para a realização de IDGA (3)

Conceitos e Características da IDGA

• O tamanho dos poros de gel
• A temperatura
• A concentração e pureza do ágar
• As concentrações das substâncias reagentes e o tamanho e forma

molecular dos reagentes.

Fatores que influenciam na velocidade da

difusão na técnica de IDGA:-

• O teste de imunodifusão em gel de ágar (IDGA)
• Diagnóstico da Anemia Infecciosa Equina (AIE) - MAPA

(Redação dada pelo(a) Portaria) 495/2010/SDA/MAPA.

• Diagnóstico da Leucose Bovina
• Diagnóstico de Língua Azul
• Diagnóstico da Artrite-encefalite dos caprinos (CAEV)
• Diagnóstico da influenza aviária
• Diagnóstico de Brucelose canina

Aplicações em Medicina Veterinária:-

**1. Ágar a l% em solução fisiológica

2. Lâmina de microscopia
3. Pipeta graduada de 5ml
4. Micropipetadores
5. Solução do Ag (gama globulina bovina a l mg de proteína por/ml)
6. Soros de camundongos imunizados com gama globulina bovina e diferentes tipos de adjuvante (completo de Freund (ACF) ou incompleto de Freund (AIF) ou com hidróxido de alumínio (AlOH3), ou ainda sem adjuvante) devendo conter, portanto, Acs anti- gama globulina bovina.
7. Molde perfurador de ágar para IDGA
8. Placas de Petri com algodão umedecido (Câmara úmida)
9. tubos de ensaio e estantes para diluição
10. Pipetas de lml
11. Solução salina**

Material para a técnica de IDGA:-

Características e Vantagens e Desvantagens da Técnica

de IDGA

Metodologia

Preparo de Diluições seriadas de razão = 2 do soro teste.

Distribuição de cada uma das diluições seriadas do soro em cada um

dos pocinhos abertos no ágar para a técnica de IDGA.

Ag

APLICAÇÃO DA TÉCNICA DE IDGA PARA O SORODIAGNÓSTICO DA ANEMIA INFECCIOSA EQUINA

Fig. 1. (A) Model of an EIAV particle showing probable locations of the major structural antigens. (B) EIAV proviral genome organization. The structural proteins of EIAV are produced from polyprotein precursor molecules that are cleaved either by a virally encoded Protease (Gag/Pol) or by cellular endoproteinases (SU/TM). LTR, long terminal repeat; PR, protease; RT- RH, reverse transcriptase-RNase H; DU, dUTPase; IN, integrase; tat, transcriptional trans-activator; rev, regulator of viral mRNA splicing and transport; SU, surface unit glycoprotein; TM, transmembrane glycoprotein.