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relatorio da partica de enzimas
Tipologia: Trabalhos
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Alunos: Carlos Eduardo de Araújo, Ester Ferreira, Melinda Belletti e Reginaldo de Sousa Disciplina: Bioquímica Professoras: Ana Claudia Schiefler e Fernanda Kamp Turma: PMQ – 351 Data de realização da prática: 14/06/ Data de entrega do relatório: 12/07/ Avaliação: CRITÉRIO:
Apresentação Introdução Objetivos Métodos Resultados Discussão Bibliografia TOTAL:
Enzimas são proteínas cuja a principal função é acelerar, em sistemas biológicos, as reações químicas em condições termodinamicamente desfavoráveis. Para uma proteína ser considerada uma enzima, ela precisa possui as seguintes características: ter eficiência catalítica, alto grau de especificidade, acelerar as reações de 10^6 a 10^12 vezes mais do que as não- catalisadas, não se alterar ou ser consumida durante a catalização, não alterar o euilíbrio químico e ter sua atividade regulada geneticamente ou por metabolismo.
Gerais: construir uma curva padrão de PNP, fazer uma curva de substrato e observar a influência do inibidor Específicos: a curva padrão foi feita visando a analisar se a preparo e o manuseio estava sendo feito corretamente; a curva de substrato feita para verificar como a enzima interage com o substrato e em seguida, a do inibidor, feito para parar a atividade enzimática e ver como ele influencia na ação da enzima.
Solução padrão de p-nitrofenol (PNP) 0,1 mM em tampão Tris-HCl pH 9,5; Solução de p-nitro-fenil-fosfato (PNPP) 1 mM em tampão Tris-HCl pH 9,5; Solução de p-nitro-fenil-fosfato (PNPP) 10 mM em tampão água tipo III; Solução tampão Tris-HCl 0,2 M, pH 7,5, 8,5, 9,5; Solução de Na 2 HPO 4 ___mM em tampão Tris-HCl 0,2 M, pH 9,5 (sol. Tampão Tris-Pi-HCl); Soluções tampão borato-NaOH 0,3 M, pH 9,5, 10,5 e 11,5; Soluções tampão citrato HCl 0,2 M, pH 5,5, 6,5, e 7,5; Solução de NaOH 2 M; Solução de enzima: fosfatase alcalina (EC 3.1.3.1) ________ μg/mL; Pipetador automático 20-100μL; Pipetador automático 200 - 1000μL; Tubos de ensaio; Vortex; Placa de 96 poços para leitor de elisa; Leitor de elisa; Banho de gelo (0°C) Banho-maria (25°C) Banho-maria (37°C) Banho-maria (68°C)
Tubo N° N mols de PNP (x)
405nm(Y) B 0 0 1 7,5 0, 2 15 0, 3 22,5 0, 4 30 0, 5 37,5 0, 6 45 0, 7 52,5 0,
