Metodos historiasticos, Esquemas de Citologia e Histologia

Baixe Metodos historiasticos e outras Esquemas em PDF para Citologia e Histologia, somente na Docsity!

Aula 1: Métodos Histológicos

Profa. Juliana de Assis Silva Gomes Estanislau estanislau.juliana@gmail.com

Citologia e Histologia Citologia – Estudo da célula Célula – Menor unidade do organismo limitada por membranas, preenchidas com uma solução aquosa concentrada de químicos e dotada da capacidade de se dividir. Histologia – Descreve a estrutura microscópica (baseada em cortes finíssimos) das células, tecidos e órgãos dos indivíduos. Células Tecidos Matriz Extracelular órgãos Epitelial Conjuntivo Nervoso Muscular Fibrilas de colágenos Membranas basais Seres vivos

✓O conhecimento sobre as células progridem paralelamente ao avanço tecnológico e as progressivas descobertas científicas. Microscópio de luz Técnicas Histoquímicas Microscópio eletrônico Separação de organelas celulares Cultura de células Biologia celular e molecular

Microscopia

✓ Observação de células e tecidos ao microscópio

Sentido da escala entre células vivas e átomos

Microscópio de luz Microscópio eletrônico Limite de resolução: menor distância que deve existir entre dois pontos para que eles apareçam individualizados

Ampliação X Resolução = Riqueza de Detalhes

➢ Consiste na obtenção do fragmento de órgão a ser estudado ➢ O material é retirado e recortado em fatias de no máximo 3 mm de espessura.

Coleta de Material

• Preservar a estrutura e composição do tecido
• Interromper o metabolismo celular
• Evitar a degradação enzimática das células e tecidos (autólise)
• Matar microorganismos patagênicos (putrefação)
• A fixação pode ser feita por métodos químicos (fixadores) ou físicos (congelamento)
• Os tecidos são imersos em soluções de agentes desnaturantes
• A fixação ocorre pela estabilização químicas entre as moléculas (formação estáveis com proteínas teciduais )
• Mais utilizado: formaldeído 4 % (MO) e Tetróxido de ósmio (ME)

Fixação

Inclusão

Microtomia

• Consiste na obtenção de cortes finos (1- 10 mm)
• Os cortes são colocados para flutuar sobre a superfície de água aquecida (distender os cortes) e depois colocados sobre as lâminas de vidro, onde aderem e são corados

Microtomia

• Consiste em mergulhar a lâmina contendo o corte no(s) corante(s), de acordo com o que se deseja corar;
• Na montagem, uma gota de resina é colocada sobre a lamínula e esta é pressionada sobre a lâmina, protegendo o corte histológico. Corantes

Coloração e Montagem

Resumindo

Obtenção da amostra Corte das peças Fixação Desidratação Clareamento Inclusão Microtomia Extensão dos cortes Transferência para a Lâmina Secagem da Lâmina Coloração Montagem

Técnicas histológicas de coloração

Básicos Hematoxilina Azul de toluidina Azul de metileno Ácidos Eosina Fucsina ácida Orange G Ácidos nucléicos Glicosaminoglicanas Glicoproteínas ácidas Mitocôndria Grânulos de secreção Proteínas citoplasmáticas Colágeno ➢Consideram características de acidez ou basicidade da estrutura a ser corada

Técnicas histológicas de coloração

Corantes ácidos: coram estruturas com componentes catiônicos de células e tecidos (componente que carregam uma carga positiva – básicas)

• Corante contém carga negativa:NA+ Corante –
• Eosina (vermelho), verde luz (verde), azul de anilina (azul), fucsina ácida (vermelho), orange G (laranja)
• acidófila: substância com afinidade por corante ácido
• Ex: Mitocondrias, grânulos de secreção, proteínas citoplasmáticas e colágen o Corantes básicos: coram estruturas com componentes aniônicos de células e tecidos (componente que carregam uma carga negativa – ácidas)
  • corante contém carga positiva : Corante+ Cl-
• azul de toluidina (azul), pironina G (vermelho), verde metileno (verde), hematoxilin (azul)
• basófilia: substância com afinidade por corante básico
• Ex: Ácidos nucleicos, glicosaminoglicanos, glicoproteínas ácidas