Imunologia Clínica
Imunoensaios
Prof.ª Priscilla Pina
Pardo
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Imunoensaios utilizando conjugados: Técnicas e aplicações, Slides de Imunologia
Uma visão geral das técnicas utilizadas em imunoensaios, com ênfase nos conjugados e na sua aplicação em diferentes tipos de testes. O texto aborda a interação ag-ac in vitro, os avanços no imunodiagnóstico, os sistemas de automação, os conjugados de ag ou ac ligados covalentemente a moléculas reveladoras, os equipamentos com detector de fluorescência, as técnicas imunoenzimáticas, como o elisa, e a técnica de blot. O documento também discute as sequências para detecção de anticorpos e antígenos, as técnicas rápidas e os testes por imunocromatografia de fluxo lateral.
Tipologia: Slides
2024
1 / 57
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Imunologia Clínica
Imunoensaios
Prof.ª Priscilla Pina Pardo
Imunoensaios utilizando conjugados
- (^) Interação Ag-Ac in vitro – Nem sempre é evidenciada por um fenômeno visível (aglutinação, precipitação...)
- (^) Avanços no imunodiagnóstico: Identificação de Ag ou Ac com o auxílio de moléculas marcadas com compostos químicos definidos e detectáveis que podem ser mensurados.
A molécula conjugada pode ser:
(^) Proteína; (^) Antígenos; (^) Imunoglobulinas;
Os antígenos podem ser representados por:
(^) Moléculas derivadas de patógenos; (^) Hormônios; (^) Marcadores celulares; (^) Marcadores tumorais; etc.
Sistemas de automação: Disponíveis equipamentos que
realizam as diversas etapas dos testes:
- (^) Pipetagem
- (^) Incubação
- (^) Leitura
- (^) Processamento
Imunofluorescência
Microscopia de fluorescência: Baseada na propriedade que algumas substâncias possuem de emitirem fluorescência após absorverem energia ultravioleta.
Diagnóstico da Raiva – Cérebro Imunofluorescência Direta
IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA
Utiliza um anticorpo antiimunoglobulina marcado com fluorocromo para a detecção de anticorpos específicos que se fixaram em antígenos celulares ou particulados presentes na fase sólida.
- (^) Maior sensibilidade em relação à imunofluorescência direta (Existem, normalmente, mais epítopos na imunoglobulina para o conjugado se ligar.)
AmostraAmostra Comercial^ Comercial Comercial^ Comercial^ AmostraAmostra Comercial^ Comercial
Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA)
- (^) Desenvolvido nos anos 70
- (^) 1985 – Muito difundido comercialmente com o ensaio para anticorpos anti-HIV
- (^) Técnica imunoenzimática sensível
- (^) Quantificação de Antígenos ou Anticorpos
Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) (^) Um dos reagentes é imobilizado na fase sólida (^) Outro pode ser ligado a uma enzima – CONJUGADO (^) Substrato forma um produto colorido – a alteração de cor é monitorada visualmente/ espectrofotômetro, que determina a relação entre a intensidade da cor e a quantidade do que está sendo analisado na amostra.
Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA)
- (^) A cavidade das placas pode ser sensibilizada com Ag ou Ac Amostra
- (^) Preferencialmente soro ou plasma
- (^) Límpida
- (^) Sem hemólise
- (^) Não-lipêmica
- (^) Conservada por até 7 dias entre 2 a 8°C ou congelada a -20°C, desde que evitados processos de congelamento e descongelamento