Doc repaso en la ucusr, Esquemas de Álgebra

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EXTRACCIÓN DE ADN

BIOLOGÍA CELULAR y MOLECULAR -

SEMANA 09

Docentes Curso Biología Celular y Molecular

Ciclo Académico: 2025- 1

Carrera de Medicina Humana^ Mayo^2025

REFLEXIÓN DESDE LA

EXPERIENCIA

RESULTADO DE APRENDIZAJE

Al finalizar la sesión, el estudiante analiza el fundamento e

importancia de la extracción de ADN, como una herramienta

para el desarrollo de diferentes técnicas moleculares.

CONTENIDOS

• Importancia
• Etapas generales de extracción
• Tipos de extracción
• Extracción con Kit comercial
• Cuantificación de ácidos nucleicos
• Calidad de ácidos nucleicos
• Automatización en la extracción de ácidos nucleicos
• Otros procedimientos de extracción utilizados

CONTENIDOS DE LA SESIÓN

https://www.fishersci.es/shop/products/fermen tas-genomic-dna-purification-kit/

SEMANA 8: EQUIPO DE DOCENTES BIOLOGÌA CELULAR 2023 - 2 IMPORTANCIA

TIPOS DE EXTRACCIÓN Extracción tradicional (Varias etapas) Extracción con Kits comercial (Pocas etapas)

PROCESO GENERAL COLECTA DE MUESTRA ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA (ÓPCIONAL) HOMOGENIZACIÓN DE LA MUESTRA EXTRACCIÓN TRADICIONAL ANÁLISIS DE ADN HOMOGENIZACIÓN QUÍMICA Etapas generales para la extración de ADN ADN Método convencional

• LISIS CELULAR
• SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS Y LÍPIDOS
• PRECIPITACIÓN DEL EDISOLUCIÓN DELADN
• PURIFICACIÓN Método por Kit comercial
  • LISIS CELULAR
  • UNIÓN DELADN A UNA MATRIZ
  • SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS Y LÍPIDOS
  • ELUCIÓN DELADN EXTRACCIÓN CON KITS COMERCIAL

EXTRACCIÓN TRADICIONAL EXTRACCIÓN CON KITS COMERCIALES Se utilizan columnnas (spin columns) con membranas de sílice capaces de unirse especificamente al ADN. Luego de la unión, se eliminan todas las sustancias no ligadas por centrifugación.

Método de Salting-Out

Después de la lisiscelular, las proteínas serán precipitadas utilizando sales (salting-out) y separadas por centrifugación. ETAPAS GENERALES PARA LA EXTRACIÓN DE ADN

Método de Fenol-Cloroformo

Después de añadir la mezcla de fenol cloroformo, se forman dos fases: orgánica y acuosa. La fase superior acuosa contiene al ADN.

Método de columna de centrifugación

¿Cuánto ADN podemos extraer?

• Células diploides —> 6 pg de ADN
• Esperma —> 3 pg de ADN
• Glóbulos blancos (5- 10 x 106 /mL sangre) —> 30 a 60 ng ¿Cuánto ADN necesitamos?
• PCR —> 1 ng de ADN (monocatenario o bicatenario)
• Equivalencia: de 1/20 de 1 uL de sangre, o 350 espermatozoides

Marcador de 1 Kb (Promega, G5711) con fragmentos de ADN que van desde 250 pb hasta 10 Kbp. Las muestras de gDNA varían desde gDNA de HMW de muy buena calidad con muy poca degradación o contaminación de RNA (Imagen 10) hasta gDNA extremadamente degradado (Imagen 1). https://genomics.ed.ac.uk/resources/sample-requirements

• Electroforesis en gel Cómo evaluar la calidad del material extraído

Procedimiento

Protocolo utilizado en sede VILLA

200 μl Solución de lisis Solución Proteinasa K 200 μl 20 μl

LISIS

UNION

ALCOHOL 96 % Solución salina tamponada con fosfato [PBS] 200 μl

5 min (^) 1 min 6500 g 1 min

ELUCIÓN

100 ul

Procedimiento

Protocolo utilizado en sede NORTE y

sede ATE