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Meio de cultura para cultivo de bactérias para identificação e separação de colônias
Tipologia: Trabalhos
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Título da aula: Bactérias/meios de cultura Introdução: Micro-organismos são células microscópicas e de vida independente que, assim como os humanos, vivem em comunidade. Sua importância deve-se à composição da maior massa de matéria viva no planeta, realizando processos químicos importantes às plantas e aos animais, no sentido que os micro- organismos são os responsáveis pela reciclagem de nutrientes essenciais e na degradação de matéria orgânica (MADIGAN, 2016). E a vida como conhecemos não existiria sem eles, já que é graças ao resultado da atividade microbiana realizada no passado que atualmente há oxigênio atmosférico (PRESS, 2016). Como os microrganismos apresentam uma imensa diversidade, existem diversas formas de estudá-los e compará-los. De acordo com TORTORA (et. al, 2005) uma das formas mais simples e velozes de analisar, morfológica, quimicamente, um microrganismo é com a utilização de um microscópio óptico e, a fim de melhorar a imagem observada, podem ser utilizadas de técnicas de contraste, as quais englobam: coloração; microscopia de campo claro; contraste de fases; fluorescência. A técnica de contraste por coloração de Gram é um método rápido e fácil, podendo se distinguir as bactérias em dois grupos: Gram- positivas (bactérias que retêm o complexo violeta de genciana/lugol e aparecem coradas em azul ou azul- arroxeado); Gram- negativas (que são descoradas pela lavagem com álcool, e se coram, posteriormente, em vermelho, pelo corante de contraste - fucsina ou safranina). A diferença deste comportamento bacterial se deve às diferenças na composição química de suas paredes. Em bactérias Gram-positivas, cerca de 90% da parede celular corresponde ao peptideoglicano. Já as bactérias
Objetivo: Realizar práticas no laboratório de microbiologia, utilizando equipamentos e procedimentos padrões para sua utilização. Apresentar os resultados obtidos através da microscopia de microrganismos, identificando por meio de cultura as bactérias e se são gram-positivas ou gram-negativas. Materiais utilizados: ● Autoclave; ● Estufa; ● Capela; ● Água destilada; ● Gral de Porcelana; ● Erlenmeyer; ● Baker; ● Luva térmica; ● Aquecedor com agitador magnético ● Balança de precisão; ● Espátula plástica; ● Proveta de vidro; ● Bastão de vidro; ● Pipeta Graduada; ● Plate Count Agar (PCA); ● Placa de Petri; ● Swabs; ● Alça de Platina; ● Bico de Bunsen; ● Lamina de vidro; ● Kit coloração de Gram (violeta de cristal, lugol, álcool- acetona, fucsina fenicada ou safranina); ● Microscópio; ● Óleo Nujol;
Metodologia: É necessário salientar que é de suma importância antes de qualquer processo, seja feito a limpeza/esterilização da bancada e usando avental, luvas, toucas etc. ● Fazer os cálculos das quantidades de materiais a serem utilizados. Para que não haja desperdícios e que o resultado final seja de uma conclusão positiva.
● Colocar o meio de cultura preparado em um Erlenmeyer para esterilização com uma tampa solta.
● Esterilizar o meio de cultura na autoclave a uma temperatura 121 graus por 45 minutos. ● Após a esterilização deixe o meio de cultura esfriar ate que esteja a uma temperatura segura para manipulação ●. ● Na capela abre as placas de petri estéreis e certifique-se de manuseá- las com cuidado para evitar a contaminação. ● Despeje uma quantidade apropriada do meio de cultura esterilizados em cada placa de petri, colocando uniformemente 5 cm em cada placa de petri.
● Esterilize a alça de platina no bico de bunsen para colher a bactéria microbiana, fazer o esfregaço e fixar a bactéria passando 3 vezes no bico de bunsen. ● Colocar as lâminas fixadas na autoclave para secar.
● Pegar as lâminas de vidro e fazer a coloração utilizando primeiro a violeta de cristal por 1 minuto, lavar com água destilada, em seguida aplicar o lugol também por 1 minuto, novamente lavar com água destilada, aplicar álcool acetona por 15 segundos, lavar com água destilada, cobrir a lâmina com fucsina fenicada ou safranina por 30 segundos, para a secagem rápida levar até a autoclave e após a secagem examinar no microscópio.
Segunda Lâmina: Amostra coletada de uma bituca de cigarro por meio de impressão ( colônia amarela); Bacteroides (bacilos alongados) Gram - positivos e Gram - negativos. Sugestivo a estreptobacilos.
Terceira Lâmina: Amostra coletada da bituca de cigarro (colônia branca); Bacteroides (bacilos alongados) Gram
