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Instruções para Contagem de Leucócitos Residuais em Câmaras de Nageotte, Notas de aula de Metodologia

Faculdade de Música Carlos Gomes (FMCG)Metodologia

Este documento fornece detalhes sobre a metodologia para contagem de leucócitos residuais em concentrados de hemácias e plaquetas desleucocitados usando uma câmara de nageotte. Inclui objetivos, responsabilidades, definições, considerações, produtos, equipamentos, utensílios, recomendações e registros.

Tipologia: Notas de aula

2022

Compartilhado em 07/11/2022

Gisele
Gisele 🇧🇷

4.5

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IT-LAB-077 Página 1 de 4
Contagem de Leucócitos Residuais pela
Câmara de Nageotte Revisão 00
SUMÁRIO
1. Objetivo
2. Responsabilidades
3. Definições
4. Siglas e Abreviaturas
5. Referências Bibliográficas
6. Condições Gerais ou Específicas
6.1. Produtos, Equipamentos e Utensílios
6.1.1. Produtos
6.1.2. Equipamentos
6.1.3. Utensílios
6.2. Considerações
6.2.1. Modelos de Câmara de Nageotte
6.2.2. Cuidados com a Câmara de Nageotte
6.3. Contagem de Leucócitos residuais em concentrado de hemácias desleucocitado
6.4. Contagem de Leucócitos residuais em concentrado de plaquetas desleucocitado
6.5. Uso da Câmara de Nageotte
7. Cálculos
8. Recomendações
9. Registros
ANEXOS:
Anexo 1: FLE 092 – Contagem de Leucócitos em câmara de Nageotte
REVISÃO ANÁLISE CRÍTICA APROVAÇÃO
Luiz Fernando Marcio Biasoli Marcio Biasoli
19/04/07 20/04/07 23/04/07
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Contagem de Leucócitos Residuais pela

Câmara de Nageotte Revisão 00

SUMÁRIO

  1. Objetivo
  2. Responsabilidades
  3. Definições
  4. Siglas e Abreviaturas
  5. Referências Bibliográficas
  6. Condições Gerais ou Específicas 6.1. Produtos, Equipamentos e Utensílios 6.1.1. Produtos 6.1.2. Equipamentos 6.1.3. Utensílios 6.2. Considerações 6.2.1. Modelos de Câmara de Nageotte 6.2.2. Cuidados com a Câmara de Nageotte 6.3. Contagem de Leucócitos residuais em concentrado de hemácias desleucocitado 6.4. Contagem de Leucócitos residuais em concentrado de plaquetas desleucocitado 6.5. Uso da Câmara de Nageotte
  7. Cálculos
  8. Recomendações
  9. Registros ANEXOS: Anexo 1: FLE 092 – Contagem de Leucócitos em câmara de Nageotte

REVISÃO ANÁLISE CRÍTICA APROVAÇÃO

Luiz Fernando Marcio Biasoli Marcio Biasoli 19/04/07 20/04/07 23/04/

Contagem de Leucócitos Residuais pela

Câmara de Nageotte Revisão 00

1. Objetivo Esta instrução de trabalho tem por objetivo estabelecer a metodologia para contagem de leucócitos residuais pela câmara de Nageotte nos concentrado de hemácias e plaquetas desleucocitados. 2. Responsabilidades

  • Técnicos do laboratório de ensaios – Executar as tarefas descrita nesta IT, preencher devidamente os
  • registros, além de abrir RNC’s e RAP’s, quando necessário.Gerente do laboratório de ensaios – supervisionar e orientar os técnicos do controle de qualidade no cumprimento de todos os princípios descritos nesta IT, aprovar ou reprovar o produto de acordo com asanalises realizadas, acompanhar e fechar RNC’s e RAP’s, quando aplicável. 3. Definições
  • Homogeneidade- Distribuição uniforme. 4. Siglas e Abreviaturas
  • Coloração – Ação de corar
  • CHD – concentrado de hemácias desleucocidado
  • CPD – Concentrado de Plaquetas desleucocitado
  • AABB – American Association of Blood Banks 5. Referências Bibliográficas
  • RDC 153 de 14 de julho de 2004
  • Procedimentos da ControlLab e de Ensaio de Proficiência – REBLAS
  • DACIE, Sir. John; LEWIS, SM – Practical Hematology
  • Technical Mannual – AABB
  • CAP – College of American Pathologists
  • Sociedade Brasileira de Hematologia e Hemoterapia 6. Condições Gerais e Específicas 6.1. Produtos, Equipamentos e Utensílios 6.1.1. Produtos
  • Ácido Acético a 1% V/V (1mL de ácido acético glacialreagente). e completar a 100mL com água
  • Corante Cristal Violeta ( Pesar 0,01g de cristal violeta e dissolver em 100mL de ácido acético a 1%).
  • Agente lisador de hemácias – LITIC DIF (solução do Coulter T890) 6.1.2. Equipamentos
  • Relógio
  • Microscópio com ocular de 10x e objetiva de 40X do microscópio invertido ou 40X com abertura
  • numéricaCâmara de Nageotte^ <^ 0,65 ou objetiva de 20X
  • Calculadora ou computador. 6.1.3. Utensílios
  • Micropipetas calibradas na faixa de 40 – 900μL
  • Ponteiras novas
  • Luvas sem talco
  • Tubos de ensaio de plástico e novos
  • Placa de Petri
  • Papel de filtro. 6.2. Considerações

ser a espelhada, esta característica melhora muito a visualização para a contagem dos leucócitos.^ É necessário utilizar uma câmara de grande volume 50^ μL (μL = mm^3 ).^ A Câmara de Nageotte deve

Contagem de Leucócitos Residuais pela

Câmara de Nageotte Revisão 00

  • Volume final é de 1000μL, ou seja, a amostra foi diluída 1:10 (100μL para 1000μL). 6.5. Uso da Câmara de Nageotte:
    • Ajustar a lamínula na câmara.
    • Homogeneizar bem o tubo com a amostra diluída.
    • Preencher a câmara de Nageotte sem excesso ou falta do material a ser examinado (área a ser examinada).
  • Colocar a câmara dentro da placa de Petri com papel de filtro umedecido, para não evaporar o líquido na câmara.
  • Deixar em repouso por 10 a 15 minutos para a sedimentação dos leucócitos.
  • Remover a tampa da placa de Petri e colocar a câmara de Nageotte no microscópio. trabalho que corresponde ao FLE-092 (Contagem de Leucócito em câmara de Nageotte).^ •^ Contar os leucócitos nos 40 retângulos da câmara e preencher o anexo 1 desta instrução de Nota: É preciso que o profissional possua experiência em identificar leucócitos para não confundir com hemácias, aglomerados de plaquetas e artefatos. 7. Cálculos Leucócitos por μL = nº de leucócitos contados 5 Nota: Divide-se por 5 pois contamos os leucócitos em 50μL, mas fizemos uma diluição 1:10, 50/10 = 5μL, logo dividindo por 5, teremos em 1μL. Leucócitos porLeucócitos / mL x mL do CHD (ou do CPD)= Leucócitos / unidade. μL x 1000μL = Leucócitos / mL 8. Recomendações
  • Estocar a amostra, na temperatura correta para evitar a não deteriorar o material.
  • Não utilizar luvas com talco pois algumas partículas podem confundir com os leucócitos na câmara decontagem.
  • Para obter experiência na contagem de leucócitos corados pelo cristal violeta devemos fazer as experiências com sangue total.
  • Validar a exatidão deste método com uma amostra de referência com contagem alta de leucócitos quantificada por outro método. Estas amostras de referência podem ser obtidas por diluições em sériecom sangue ou componentes do sangue que tenham sido reduzido por 2 passagens em filtros de redução. As contagens obtidas das amostras diluídas em série podem ser comparadas com os valoresteóricos esperados por cálculo.
  • Esta técnica não possui exatidão para concentrações em torno de 1 leucócito/μL. 9. Registros Arquivamento Arquivo morto Nome do Registro (N.º do Anexo) Indexação^ Tempo^ Local^ Tempo FLE092 – Contagem de Leucócitoem Câmara de Nageotte (Anexo 01)

Produto/ Lote/ Data

Enquantodurar o estoque LAB 2 anos