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Avaliação de substratos locais para produção de Trichoderma harzianum para uso em controle biológico Evaluation of local substrates for the production of Trichoderma harzinum for use in biological control
PEREIRA, Scarlet Isabelle Machado¹; COELHO NETTO, Rosalee Abulquerque ² ¹ Uniasselvi, scarletbellebio@gmail.com; ² CSAS/INPA, rosaleecoelho@gmail.com
Tema Gerador: Estratégias Econômicas em Diálogo com a Agroecologia
Resumo Apesar dos resultados favoráveis com o uso de diversas espécies de Trichoderma para controle biológico, há pouca disponibilidade de inóculo para os agricultores utilizarem em seus plantios. Arroz é o substrato mais usado para produção massal de Trichoderma spp_._ para controle biológico. Além de ser um alimento, tem custo relativamente elevado. Este estudo avaliou substratos constituídos de misturas de resíduos vegetais disponíveis localmente no Amazonas, serragem + resíduo de cervejaria, serragem + farelo de arroz, serragem + casca de tucumã, bainha de palmito de pupunha + resíduo de cervejaria, bainha de palmito de pupunha + farelo de arroz, bainha de palmito de pupunha + casca de tucumã, casca de mandioca + resíduo de cervejaria, casca de mandioca + farelo de arroz, casca de mandioca + tucumã , de baixo custo, e avaliou-as, bem como a umidade mais favorável para produção de Trichoderma harzianum. Das nove misturas de resíduos avaliadas a mistura de bainha de palmito de pupunheira + farelo de arroz e casca de mandioca + farelo de arroz proporcionaram as maiores esporulações do fungo, superiores a do arroz e das demais misturas. Palavras Chaves : produção de inóculo; biocontrole.
Abstract Despite of the favorable results with the use of various species of Trichoderma for biological control, there is few availability of inoculum for the farmers to use in their plantations. Rice is the most used substrate for mass production of Trichoderma spp. For biological control. Besides being a food, it has a relatively high cost. This study evaluated substrates constitude of mixtures of vegetable residues available locally in Amazonas, sawdust + brewer 's residue, sawdust + rice bran, sawdust + tucumã bark, pupunha palm heart + brewer' s residue, pupunha palm heart + rice bran , Pupunha palm bark + tucumã bark, cassava husk + brewer's residue, cassava husk + rice bran, low cost cassava husk + tucumã, and evaluated them, as well as the more favorable humidity for the production of Trichoderma harzianum. Of the nine mixtures of residues evaluated the mixture of palmito sheath of peach palm + rice bran and cassava husk + rice bran provided the greatest sporulation of the fungus, superior to rice and other mixtures. Key words: Inoculum production; Biocontrol.
Introdução Fungos do gênero Trichoderma apresentam potencial para o controle de fitopatógenos e para a promoção do crescimento vegetal. (Machado et al., 2012). O arroz é o principal substrato utilizado para multiplicação de fungos utilizados em controle biológico. Outros substratos, de baixo custo, podem ser usados e têm sido avaliados no cultivo de Trichoderma spp. (Subash et al. 2014), porém, não há acesso rápido para que os agricultores utilizem em seus plantios. Este estudo avaliou substratos constituídos de misturas de resíduos vegetais disponíveis localmente no Amazonas, verificando quais as misturas que obtiveram maiores esporulações do fungo e que pudessem ser utilizadas por pequenas empresas para a disponibilização ao agricultor, beneficiando ambos, onde um passará a fabricar inóculo em massa de maneira mais eficaz e de baixo custo e outro passará a suprir sua necessidade sem uma espera demorada e por um preço e locais mais acessíveis.
Material e Métodos O trabalho foi desenvolvido no laboratório de Fitopatologia do Instituto Nacional de Pesquisas na Amazônia (INPA) em Manaus, AM. Foram preparadas nove combinações de substratos misturados dois a dois. Com base na relação C:N de cada substrato (Tabela 1) foram definidas as proporções de cada componente na mistura de modo que a proporção C:N se aproximasse de 40:1 que é considerada ótima para produção de Trichoderma (Steyaert et al., 2010). Para o cálculo utilizou-se a fórmula de Gomes et al. (2001), utilizada, originalmente, para o cálculo de proporção de componentes de pilhas de composto: PMRC= (30 x Nn) - Cn Cc - (30 x Nc) Onde: PMRC: partes de material rico em C; Nn: teor de N do material rico em N; Cn: teor de C do material rico em N; Cc: teor de C do material rico em C; Nc: teor de N do material rico em C.
Testaram-se misturas dos substratos: 1. Casca e entrecasca de macaxeira ( Manihot esculenta Crantz), 2. Resíduo de cervejaria (bagaço de malte ( Hordeum vulgare L.) e leveduras ( Saccharomyces cerevisiae Meyen ex Hansen), 3. Bainha de palmito de pupunheira ( Bactris gasipaes Kunth), 4. Farelo de arroz ( Oriza sativa L); 5. Casca de tucumã ( Astrocaryum aculeatum Mayer) e 6. Grãos de arroz (testemunha). Os resíduos foram secos em estufa a 60 oC, por 24 horas e antes das misturas os resíduos 1, 3 e 5 foram triturados em moinho de faca.
Para avaliar a colonização das misturas de substratos utilizou-se o isolado de Trichoderma harzianum Rifai, INPA 1334, armazenado na coleção de Microrganismos de Interesse Agrossilvicultural do INPA, utilizado com sucesso no controle de podridão de Sclerotium em pimentão (Coelho Netto, et al ., 2013).
Transferiram-se porções de 100 g das misturas dos substratos e do arroz para sacos de polipropileno (30 x 15 cm) contendo na boca um anel de cano de PVC (40 mm de largura x 38,1 mm de diâmetro) preso com uma liga de borracha e fechado com um tampão de algodão para permitir a troca gasosa com o ambiente (Lohmann et al. , 2007). Os grãos de arroz umedecidos com 10 mL de água e as misturas de resíduos com as umidades descritas na Tabela 2 foram autoclavados por dois dias consecutivos, por 20 minutos (120 oC e 1 atm de pressão) e, após o resfriamento, transferiu-se, em câmara asséptica, um disco de colônia de T. harzianum (0,5 cm de diâmetro), cultivada em BDA, por trinta dias. Incubou-se o conteúdo dos sacos em laboratório sob temperatura aproximada de 27 oC por 15 dias, sob iluminação contínua fornecida por lâmpadas fluorescentes tubulares de 40w localizadas 50 cm acima dos sacos. Em dias alternados procedeu-se o revolvimento do conteúdo dos sacos para uniformizar o crescimento do fungo no substrato. Após este período retirou-se, de cada saco, uma amostra de 1 g que foi utilizada para quantificação da esporulação do fungo em câmara de Neubauer, após diluição em série (Alfenas e Mafia, 2008). Para as determinações das concentrações de conídios das suspensões utilizou-se microscópio óptico, 250x ou 400x. A umidade que proporcionou maior esporulação para cada substrato (Tabela 2) foi avaliada em três repetições. O experimento teve delineamento inteiramente casualizado com três repetições e dez tratamentos (misturas de substratos e testemunha). A média do número de colônias de Trichoderma em cada substrato foram transformadas em log x+1 e submetidas a análise de variância e a teste de separação de médias (Tukey), Tabela 3.
Tabela 1 – Teores de carbono, nitrogênio e relação C:N de resíduos agrícolas e industriais encontrados no Amazonas. Resíduo C (%) N (%)
C:N Referência
1 Casca e entrecasca de raízes de macaxeira 28,8 0,3 96/1 Ricci et al. 2006. 2 Resíduo de cervejaria 52,8 4,4 12/1 Ricci^ et al.^ 2006. 3 Bainha de palmito de pupunheira 40,97 0,33 124/1 Sales-Campos et al. ,2010. 4 Farelo de arroz 38,38 1,76 21/1 Montovani et al. ,2012. 5 Casca de tucumã 51,35 5,18 10/1 Kleinlein, 2010. 6 Serragem 85,6 0,1 865/1 Ricci et al. 2006.
Tabela 2- Composição das nove misturas de resíduos por componente (g) e quantidade de água (mL). Resíduos Quantidade dos resíduos (g) por misturas de substratos 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Serragem 48,71 14,52 55, Resíduos de cervejaria 51,29 67,94 70, Farelo de arroz 85,48 68,50 44, Casca de tucumã 44,45 73,40 74, Bainha de palmito de pupunheira 32,06 31,50 26, Casca de macaxeira 29,86 55,25 25, Água (mL) 40 30 25 40 40 20 40 40 20
Resultados e Discussão Inicialmente foram testadas duas umidades para cada mistura para que fosse selecionada a que proporcionava a melhor esporulação, usando a que foi mais favorável e descartando as demais, elaborando assim, outro experimento utilizando a umidade escolhida anteriormente para que fosse realizado o teste de médias e variância
multiplicar e fornecer agentes de controle biológico utilizando resíduos de baixo custo, podendo assim atender à necessidade dos agricultores.
Agradecimentos Ao órgão financiador do projeto, CNPQ, ao Programa de Iniciação Científica do INPA – Instituto Nacional de Pesquisas na Amazônia, a orientação da doutora Rosalee A. Coelho Netto, laboratório de fitopatologia do INPA, bem como a sua equipe técnica e a instituição de ensino a que pertenço, UNIASSELVI.
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