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Métodos de DNA Recombinante na Escherichia Coli: Introdução, Objetivos e Fundamentos, Esquemas de Biotecnologia

Uma revisão sistemática sobre os métodos da técnica de dna recombinante feitos na bactéria escherichia coli. Ele aborda o objetivo, metodologia, introdução à engenharia genética e tdr, características de e. Coli, aplicativos da tdr e suas fundações teóricas. O texto é extraído de uma publicação científica publicada em 2020.

Tipologia: Esquemas

2022

Compartilhado em 13/11/2022

fabiolla-lima
fabiolla-lima 🇧🇷

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MÉTODOS DA TÉCNICA
DO DNA RECOMBINANTE
FEITOS NA ESCHERICHIA
COLI
Antônio Fábio; Beatriz Amâncio; Francisco
Abrantes da Silva Junior; Fabíola Lima e
Vitória Costa de Oliveira
Prof ª. Me. Sabrina Vieira
FACULDADE SÃO FRANCISCO DA PARAÍBA
CURSO DE BACHARELADO EM FARMÁCIA
BIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICA
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MÉTODOS DA TÉCNICA

DO DNA RECOMBINANTE

FEITOS NA ESCHERICHIA

COLI

Antônio Fábio; Beatriz Amâncio; Francisco Abrantes da Silva Junior; Fabíola Lima e Vitória Costa de Oliveira Prof ª. Me. Sabrina Vieira FACULDADE SÃO FRANCISCO DA PARAÍBA CURSO DE BACHARELADO EM FARMÁCIA BIOTECNOLOGIA FARMACÊUTICA

INTRODUÇÃO

 (^) FRANCISCO, I. P. B; JESUS, L. F. BORGES, D. A. Métodos da técnica do DNA recombinante feitos na Escherichia coli. Id on Line Rev. Mult. Psic. V.14, N. 51 p. 467-474, Julho. 2020.  (^) OBJETIVO;  (^) METODOLOGIA: Revisão sistemática de literatura

 BACTÉRIA

 Unicelulares e procariontes -> reino monera

 Patologias

 Simbiose (utilidade biológica)

 Utilização:

 biorremediação

 fermentação láctica

 probióticos

INTRODUÇÃO

ESCHERICHIA COLI

1ª bactéria com sucesso -> TDR Célula hospedeira simples INTRODUÇÃO Fácil manuseio Baixo custo Reprodução

FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA TÉCNICA DO DNA RECOMBINANTE (TDR) 1 2

FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA

 (^) As bactérias eram conhecidas por sua patogenicidade (STELLA, 2009)  (^) Em 1971, um grupo da Universidade de Stanford, desenvolveu um híbrido de DNA de um bacteriófago lambda e do vírus SV-40, constituindo a primeira molécula de DNA Recombinante. Contudo, só em 1973, Herbert Boyer e Stanley Cohen realizaram o experimento de introduzir o DNA ribossomal de um sapo em um plasmídeo, que foi introduzida na E. coli, observando-se a capacidade de replicação da bactéria (RESENDE, 2015)  (^) TDR foi sintetizado o primeiro fármaco, a insulina humana (RESENDE, 201

2

TÉCNICA DO DNA

RECOMBINANTE (TDR)

 (^) Com o intuito de manufaturar a insulina artificial, utiliza-se a clonagem da E. coli mutada com o segmento gênico, que representa a produção da proteína e acrescentado a este, um fator de resistência a um antibiótico específico. A bactéria multiplicará em um meio de cultura contendo o antibiótico específico. Isso só é possível, pois ao incorporar os genes, a característica adquirida pelas bactérias torna-se permanente e hereditária (ROSSI, 2001).  (^) Processo de reprodução assexuada, serão geradas novas células com as modificações gênicas previamente alteradas;  (^) Utiliza-se enzimas de restrição; DNA-ligase;

 (^) São enzimas reconhecem uma sequencia especifica de bases do DNA, chamadas de sitio de restrição.  (^) Tipo 2 utilizada, reconhece sequências palindrômicas (lê tanto no sentido 5’ para 3’, ou 3’ para 5’.  (^) Corte feito para extremidades serem coesivas (podem emparelhar por complementariedade).

ENZIMAS DE RESTRIÇÃO

● (^) Enzima de adesão, responsável por unir as extremidades do DNA. ● (^) Liga extremidade 5’ com a 3’. ● (^) Para ocorrer a Dna ligase, é necessário:

  • ATP -Magnésio.

DNA LIGASE

TRANSFORMAÇÃO QUÍMICA

FORMA NATURAL FORMA INDUZIDA

 (^) Selecionar bactérias marcador de antibiótico;  (^) Introduzi-las no meio;  (^) Crescerão e se replicarão vetor confere sua resistência;  (^) Sinal químico que as instrui a traduzir a proteína alvo;  (^) “mini fábricas”;  (^) Larga escala

SELEÇÃO DE ANTIBIÓTICO

 (^) A cromatografia representa uma vasta quantidade de técnicas de separação de misturas e baseia-se na diferença das propriedades físicas, entre as moléculas distintas dentro de uma solução (MARTINS,2009).

PURIFICAÇÃO

 (^) O processo cromatográfico compreende cinco etapas:  (^) o equilíbrio das fases;  (^) aplicação da amostra;  (^) lavagem ou remoção do material não ligado;  (^) fracionamento da biomolécula e limpeza da coluna, onde ocorre a eluição e lavagem de impurezas.

PURIFICAÇÃO