COMPLEJO PRINCIPAL DE HISCOCOMPATIBILIDAD Y TECNICAS INMUNOLOGICAS
ANTICUERPOS MONOCLONALES Y POLICLONALES
Animal con epítope deseado para producir el anticuerpo deseado
Policlonales: Mezcla de anticuerpos que reconocen diversos epítopes.
Monoclonales: Se aíslan como un solo tipo de anticuerpo y por lo tanto pueden reconocer un solo epítope y ofrecen
mayor especificidad.
PRODUCCION DE MONOCLONALES
Se producen a partir de hibridomas (Línea celular: Células inmortalizadas) Linfocitos B + Mielomas Linfocitos B en
proceso carcinogénico para inmortalización HIBRIDOMA
- Inmunización del animal
- Incubación por tres días para producir anticuerpos necesarios
- Activación de Linfocitos B (Bazo, por ejemplo)
- Fusión de linfocitos con mielomas para producir los hibridomas
- Proceso de selección para los hibridomas
- SELECCIÓN EN MEDIO HAT
oNutrientes para células
oEnriquecido con precursores de nucleótidos hipoxantina y timidina
oAminopterina (Inhibidor de síntesis de Novo de Ácidos Nucleicos obtenido de productos cárnicos)
Enzima HPRT para utilizar precursores de Ácidos Nucleicos
HPRT: Hipoxantina guanina fosforribosiltransferasa
- HPRT+ = ESTA EN LOS LINFOCITOS B
oInhibida la ruta de síntesis de novo
oSolo utilizan precursores de nucleótidos
oProducen anticuerpos y enzima
oSe mueren con el tiempo
- HPRT - = ESTA EN LOS MIELOMAS
oNo producen enzima ni anticuerpos
oSolo sobreviven con la síntesis de novo
oNo sintetiza precursores ácidos nucleicos
oInmortales
ELISA CON EL ANTIGENO QUE SE QUIERE RECONOCER EN PARTICULAR Y LOS POSOS QUE DEN POSITIVO SON LAS QUE SE
TOMAN YA QUE SON LOS ANTICUERPOS QUE RECONOCEN A UN ANTIGENO ESPECIFICO (ANTICUERPO MONOCLONAL)
PRODUCCION A ESCALA DE ANTICUERPO MONOCLONAL
- PRODUCCIÓN DE LIQUIDO ASCÍTICO EN ANIMALES
oSe inyecta el antígeno o el anticuerpo en el animal vía subperitoneal con un coadyuvante de
inmunización
- CULTIVO DE TEJIDO IN VITRO
oSe lleva al hibridoma en producción en biorreactores
PRODUCCIÓN DE POLICLONALES PRIMARIOS
- Primarios: Reconocen directamente diversos epítopes de un anticuerpo
- Secundarios: Reconocen el epítope de un anticuerpo primario
