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El uso y componenes químicos de tripteína soya agar, un medio de cultivo utilizado para el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos aerobios y anaerobios. El medio se complementa con sangre para el crecimiento de microorganismos exigentes y permite la observación claras de reacciones de hemólisis. El documento también incluye instrucciones para la preparación y almacenamiento del medio.
Qué aprenderás
Tipo: Monografías, Ensayos
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Medio utilizado para propósitos generales, favorece el desarrollo y aislamiento de una gran variedad de microorganismos aerobios, y anaerobios facultativos y estrictos. Al ser suplementado con sangre permite el crecimiento de micro- organismos exigentes y la clara visualización de reacciones de he- mólisis. Su fórmula cumple con los requerimientos de la Armonización de Farmacopeas Europea, Japonesa y de los Estados Unidos de Nor- teamérica (EP, JP y USP respectivamente).
FUNDAMENTO En el medio de cultivo, la tripteína y la peptona de soya aportan nutrientes ricos en péptidos, aminoácidos libres, bases púricas y pirimídicas, minerales y vitaminas. La peptona de soya además es fuente de hidratos de carbono que estimulan el crecimiento de diversos microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es el agente solidificante. Puede ser utilizado como base a la cual se suplementa con nu- trientes o con antimicrobianos, lográndose un medio enriquecido o selectivo de acuerdo al aditivo. El agregado de 5-10 % sangre ovina desfibrinada estéril (Britasheep) promueve el desarrollo de bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales y la adecuada observación de las reacciones de hemólisis. El agregado de extracto de levadura en concentración 0,6 % favo- rece el crecimiento de especies de Listeria. Es un medio adecuado para cultivar y mantener cepas de Aeromo- nas, y aumentando el porcentaje de cloruro de sodio, para mante- ner cepas de algunos Vibrios (excepto V. cholerae).
CONTENIDO Y COMPOSICIÓN Código B0210205: envase x 100 g. Código B0210206: envase x 500 g.
FÓRMULA (en gramos por litro) TRIPTEÍNA ..................................................................................................................................15. PEPTONA DE SOYA ............................................................................................................. 5. CLORURO DE SODIO......................................................................................................... 5. AGAR ...............................................................................................................................................15. pH FINAL: 7.3 ± 0.
Disolver 40 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Mezclar y dejar reposar 5 minutos. Calentar agitando suavemente y hervir durante 1 o 2 minutos hasta su disolución total. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 118-121 ºC durante 15 mi- nutos. Preparación de Agar Sangre: agregar 5-10 % de sangre ovina desfibrinada estéril (Britasheep) al medio esterilizado, fundido y enfriado a 45-50 ºC. Homogeneizar y distribuir en placas de Petri estériles.
CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO Medio de cultivo deshidratado: color beige claro, homogéneo, libre deslizamiento. Medio de cultivo preparado: color ámbar. Suplementado con sangre: color rojo cereza.
ALMACENAMIENTO Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC. Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC.
PROCEDIMIENTO Siembra Por inoculación directa del material en estudio, sobre la superficie del medio de cultivo.
Incubación El tiempo, la temperatura, y la atmósfera de incubación, dependerán del microorganismo que se quiera recuperar. En general se recomienda: Bacterias de fácil crecimiento: en aerobiosis, a 33-37 º C durante 18 a 24 horas. Bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales: en atmós- fera con 5 % de CO 2 , a 3 3 -37 ºC durante 24-48 horas.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS Observar las características de las colonias. Para el medio de cultivo conteniendo sangre, observar las reaccio- nes de hemólisis:
Tripteína Soya Agar suplementado con 5% de sangre ovina:
CONTROL DE ESTERILIDAD RESULTADO Medio sin inocular Sin cambios
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1 - REV.
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DIAGNÓSTICO IN VITRO CÓDIGO Nº ELABORADOR ESTÉRIL Nº DE DETERMINACIONES
LOTE Nº FECHA DE VENCIMIENTO
LÍMITE DE TEMPERATURA
INSTRUCCIONES DE USO
MICROORGANISMOS Escherichia coli ATCC 8739 Staphylococcus aureus ATCC 6538 Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 Enterococcus faecalis ATCC 29212
MICROORGANISMOS Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Streptococcus pneumoniae ATCC 49619
CRECIMIENTO Satisfactorio
Satisfactorio
Satisfactorio
Satisfactorio
HEMÓLISIS Beta
Alfa
Alfa
CRECIMIENTO Satisfactorio
Satisfactorio
Satisfactorio
Hemólisis alfa: lisis parcial de los glóbulos rojos. Se observa un halo de color verdoso alrededor de la colonia en estudio. Es debido a la oxidación de la hemoglobina a metahemoglobina (compuesto de color verdoso) por el peróxido de hidrógeno generado por los microorganismos. Hemólisis beta: lisis total de los glóbulos rojos. Se observa un halo claro, brillante alrededor de la colonia en estudio. Hemólisis gamma: ausencia de lisis de los glóbulos rojos. El me- dio de cultivo no presenta modificaciones de color y aspecto alre- dedor de la colonia en estudio.
Equipos y material de laboratorio, microorganismos para con- trol de calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales según requerimiento.
REFERENCIAS
INDICACIONES AL CONSUMIDOR Utilizar el producto hasta su fecha de vencimiento. Conservar el producto según las indicaciones del rótulo.
Dir. Técnico: Bioq. Alejandro Rossi