Glucosa
Trinder. GOD-POD
GLUCOSE -TR
Determinación cuantitativa de glucosa
IVD
Conservar a 2-8ºC
PRINCIPIO DEL MÉTODO
La glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidación de glucosa a ácido
glucónico. El peróxido de hidrógeno (H2O2), producido se detecta
mediante un aceptor cromogénico de oxigeno, fenol-ampirona en
presencia de peroxidasa (POD):
β-D-Glucosa + O2 + H2O Ácido glucónico + H⎯⎯⎯→⎯GOD 2O2
H2O2 + Fenol + Ampirona Quinona + H⎯⎯⎯→⎯POD 2O
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de
glucosa presente en la muestra ensayada1,2.
SIGNIFICADO CLÍNICO
La glucosa es la mayor fuente de energía para las células del
organismo; la insulina facilita la entrada de glucosa en las células.
La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con una
hiperglucémia, causada por un déficit de insulina1,5,6.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los
datos clínicos y de laboratorio.
REACTIVOS
R 1
Tampón TRIS pH 7,4
Fenol 92 mmol/L
0,3 mmol/L
R 2
Enzimas
Glucosa oxidasa (GOD)
Peroxidasa (POD)
4 - Aminofenazona (4-AF)
15000 U/L
1000 U/L
2,6 mmol/L
GLUCOSE CAL Patrón primario acuoso de Glucosa 100 mg/dL
PREPARACIÓN
Reactivo de trabajo (RT): Disolver () el contenido de un vial de
R 2 Enzimas en un frasco de R 1 Tampón.
→
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
Estabilidad: 1 mes en nevera (2-8ºC) o 7 días a Temperatura
ambiente (15-25ºC).
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos
bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita la
contaminación durante su uso.
No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
GLUCOSE CAL
Una vez abierto, es estable 1 mes si se mantienen los viales bien
cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partículas y turbidez.
- Absorbancia (A) del Blanco a 505 nm 0,10. ≥
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 505 nm.
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio.
MUESTRAS
Suero o plasma, libre de hemólisis1 y LCR.
El suero debe separarse lo antes posible del coágulo.
Estabilidad: La glucosa en suero o plasma es estable 3 días a 2-8ºC.
PROCEDIMIENTO
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . 505 nm (490-550)
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz
Temperatura. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear en una cubeta:
Blanco Patrón Muestra
RT (mL) 1,0 1,0 1,0
Patrón (Nota1,2) (µL) -- 10 --
Muestra (µL) -- -- 10
4. Mezclar e incubar 10 minutos a 37ºC ó 30 min a temperatura
ambiente (15-25ºC).
5. Leer la absorbancia (A) del Patrón y la muestra, frente al Blanco de
reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos.
CÁLCULOS
Patrón)A(
Muestra)A( x 100 (Conc. Patrón) = mg/dL de glucosa en la muestra
Factor de conversión: mg/dL x 0,0555= mmol/L.
CONTROL DE CALIDAD
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar
el instrumento, los reactivos y el calibrador.
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
correcciones en el caso de que los controles.
VALORES DE REFERENCIA1
Suero o plasma:
60 – 110 mg/dL
≅
3,33 – 6.10 mmol/L
LCR:
60 – 80 % del valor en sangre
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
establezca sus propios valores de referencia.
CARACTERISTICAS DEL METODO
Rango de medida: Desde el límite de detección de 0,04 mg/dL hasta el
límite de linealidad de 500 mg/dL.
Si la concentración es superior al límite de linealidad, diluir la muestra 1/2
con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
Precisión:
Intraserie (n=20) Interserie (n=20)
Media (mg/dL) 96,8 241 98,4 248
SD 0,81 1,43 1,55 3,73
CV (%) 0,83 0,59 1,58 1,50
Sensibilidad analítica: 1 mg/dL = 0,0036 A.
Exactitud: Los reactivos de SPINREACT (y) no muestran diferencias
sistemáticas significativas cuando se comparan con otros reactivos
comerciales (x).
Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes:
Coeficiente de correlación (r): 0,99.
Ecuación de la recta de regresión: y= 1,0x + 0,12.
Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
INTERFERENCIAS
No se han observado interferencias con: hemoglobina hasta 4 g/L,
bilirrubina hasta 20 mg/L, creatinina hasta 100 mg/L, galactosa hasta 1 g/L.
Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la
determinación de la glucosa3,4.
NOTAS
1. La calibración con el Patrón acuoso puede dar lugar a errores
sistemáticos en métodos automáticos. En este caso, se recomienda
utilizar calibradores séricos.
2. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensación.
3. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la
aplicación de este reactivo en distintos analizadores.
BIBLIOGRAFÍA
1. Kaplan A. Glucose. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
Toronto. Princeton 1984; 1032-1036.
2. Trinder P. Ann Clin Biochem 1969; 6: 24-33.
3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
PRESENTACIÓN
Ref:1001190 4 x 125 mL
Ref:1001191 4 x 250 mL
Cont.
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