UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA
LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PRACTICA Nª 9
EXTRACCIÓN Y RECONOCIMIENTO DE COLESTEROL DE LA YEMA DE HUEVO
OBJETIVOS
1. Extraer colesterol de la yema del huevo, utilizando acetona como disolvente.
2. Determinar cualitativamente la presencia de colesterol en la yema de huevo mediante un
método colorimétrico.
TEORIA RELACIONADA
Los lípidos presentes en la yema son de naturaleza variada, destacando los triacilglicéridos, el
colesterol y los fosfolípidos. Mediante una extracción fraccionada se pueden separar los menos
polares, solubles en acetona (triacilglicéridos y colesterol) de los más polares (fosfolípidos), que
serían solubles en disolventes como la mezcla cloroformo/metanol.
Los métodos analíticos para la determinación del colesterol se dividen en colorimétricos y
enzimáticos. De los primeros, el más popular es el de Liebermann-Burchard, en el que la reacción
tiene lugar en un medio ácido fuerte (ácido sulfúrico). La etapa inicial del proceso consiste en la
protonación del grupo hidroxilo del colesterol, seguido de su deshidratación para formar un ión
carbonio 3,5-colestadieno. La oxidación secuencial de este ión carbonio alílico por el sulfúrico
produce un compuesto cromóforo, el colestahexano-ác. sulfónico, que absorbe energía en la zona de
la luz visible, a 410 nm.
MATERIALES Y REACTIVOS
Vaso de precipitado 100 mL
Vaso de precipitado 50 mL
Pipeta de 5 mL
Agitador de vidrio
Tubos de ensayo (2)
Acetona
Reactivo de Liebermann-Burchard(se prepara mezclando 1 ml de anhídrido acético + 1ml de
cloroformo, se enfrían a 0o C y se le añade una gota de ácido sulfúrico concentrado)
PROCEDIMIENTO
1. Extracción de colesterol de la yema de huevo.
Cascar un huevo de gallina con precaución y separar la clara de la yema, teniendo cuidado de no
romper ésta. Decantar la clara y tomar 1 g de la yema, en un vaso de 50 ml. Añadir sobre la yema 5
ml de acetona fría y agitar con la varilla de vidrio, hasta obtener una suspensión homogénea. Verter
el contenido en un tubo de centrífuga y centrifugar a 2000 RPM durante 10 minutos.
