INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
EN COMPETENCIAS PROFESIONALES
ELABORADO POR: D.C.B. MARIO JAVIER GUTIERREZ FERNANDEZ. Sept-2022 rev1 1
Unidad II. Espectrofotometría
PRACTICA No 2
Determinación cualitativa de los elementos, compuestos químicos,
inorgánicos de una muestra mediante el uso de la espectrofotometría.
SECUENCIA DE APRENDIZAJE
1. Identificar los principios y métodos de espectrofotometría visible y ultravioleta.
2. Identificar la metodología a utilizar el análisis de la muestra.
3. Interpretar los resultados y compararlos con los estándares establecidos.
INTRODUCCIÓN:
El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o
transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene
una cantidad conocida de la misma sustancia.
Todas las sustancias pueden absorber energía radiante. El vidrio, que parece ser completamente
transparente, absorbe longitudes de onda que pertenecen al espectro visible; el agua absorbe
fuertemente en la región del IR. La absorción de las radiaciones UV, visibles e IR depende de la
estructura de las moléculas, y es característica para cada sustancia química. El color de las
sustancias se debe a que absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas
y sólo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida.
REVISIÓN DE CONCEPTOS PREVIOS A LA ACTIVIDAD EXPERIMENTAL
Investiga el concepto de: Análisis Cualitativo, Colorimetría, Analito.
Objetivo: El alumno determinará la estructura y concentración de diferentes analitos en muestras
representativas a través de técnicas espectroscópicas para la mejora de la calidad del bioproceso.
FUNDAMENTO TEÓRICO:
Diferentes sustancias químicas absorben diferentes frecuencias de luz. Los colorímetros se basan
en el principio de que la absorbancia de una sustancia es proporcional a su concentración, y es por
eso que las sustancias más concentradas muestran una lectura más elevada de absorbancia. Se
usa un filtro en el colorímetro para elegir el color de luz que más absorberá el soluto, para maximizar
la precisión de la lectura. Note que el color de luz absorbida es lo opuesto del color del espécimen,
por lo tanto, un filtro azul sería apropiado para una sustancia naranja.
Los sensores miden la cantidad de luz que atravesó la solución, comparando la cantidad entrante y
la lectura de la cantidad absorbida.
Se realiza una serie de soluciones de concentraciones conocidas de la sustancia química en estudio
y se mide la absorbancia para cada concentración, así se obtiene una gráfica de absorbencia
respecto a concentración. Por extrapolación de la absorbencia en la gráfica se puede encontrar el
valor de la concentración desconocida de la muestra.
DESARROLLO EXPERIMENTAL
Material y reactivos por equipo de laboratorio
MATERIAL
REACTIVOS
EQUIPO
Matraces aforados de 25 ml
CUSO4
UV-VIS Lamba 20
Espectrofotómetro
Celdas de acrílico
K2Cr2O7
BALANZA ANALÍTICA
Pipetas de 1 ml
H20
Picetas con agua destilada
