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Año del Bicentenario, de la consolidación de nuestra Independencia, y de la conmemoración
de las heroicas batallas de Junín y Ayacucho”
FACULTAD DE INGENIERÍA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
PRÁCTICA 2: AISLAMIENTO DE ENTEROBACTERIAS
LABORATORIO : MICROBIOLOGÍA – DACB
CICLO : IV
DOCENTE : Blga. Aydeé Marilú Solano Reynoso
INTEGRANTES : YEPEZ HERHUAY MOISES ERNESTO
ANIVAL EDGAR CCAICURI ASPUR
ABDON ELOY PUMAPILLO PECEROS
DURAND GONZALES, JHON LINCOL
ANDAHUAYLAS – APURIMAC – PERÚ 2024
I. MARCO TEÓRICO
La familia Entero bacteriácea constituye un grupo grande y heterogéneo de bacterias
Gram negativas. Reciben su nombre por la localización habitual como saprofitos en el tubo
digestivo, aunque se trata de gérmenes ubicuos, encontrándose de forma universal en el suelo, el
agua y la vegetación, así como formando parte de la flora intestinal normal de muchos animales
además del hombre.
Las Enterobacterias son una gran familia reconocidas como un grupo importante en la
industria alimentaria para monitorear la higiene y el saneamiento. Este grupo incluye una gama
completa de microorganismos, incluidas todas las bacterias Coliformes. Sus miembros abarcan
desde bacterias como la Salmonella y la Escherichia coli, bien conocidas por causar
enfermedades transmitidas por los alimentos, hasta agentes de deterioro de los alimentos y
diversos microorganismos que normalmente se encuentran en el tracto intestinal humano como
parte de la flora intestinal. Su distribución ubicua hace que sea casi inevitable que algunos
miembros de Enterobacteriaceae ingresen a la cadena alimentaria.
Las Enterobacterias se caracterizan por ser anaerobios facultativos, con forma de varilla,
negativos a la oxidasa, que fermentan la glucosa en ácido y/o dióxido de carbono. Generalmente
móviles, tienden a tener una longitud de 1–5 μm.
Las Enterobacterias no patógenas se consideran "organismos indicadores" en la
industria alimentaria, ya que su detección y enumeración puede indicar un procesamiento
inadecuado y un saneamiento deficiente en el entorno de procesamiento.
La familia comprende muchos géneros (Escherichia, Shigella, Salmonella, Enterobacter,
Klebsiella, Serratía, Proteus y otros más).
también vira a un color rosado fuerte. Mientras que los bacilos Gram negativos
no fermentadores de la lactosa forman colonias de color rosado pálido similar al
medio o incoloras.
Fig. N° 2: A: Agar Endo virgen
B: Agar Endo sembrado, en la
mitad del agar puede notarse
el brillo metálico de una cepa
de E. coli.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
- Bacterias lactosa positivas: coloración rojiza
- Rojas con brillo metálico estable: E. coli
- Rojas hasta rojizas, semiesféricas, mucosas; Enterobacter aerógenes y otros
- Bacterias lactosa negativas: incoloras, claras
2. AGAR MAC CONKEY:
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil
desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos a partir de muestras clínicas, aguas
y alimentos.
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla
de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el
desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva. El agar es el agente
solidificante.
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto
produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las
colonias, y la precipitación de las sales biliares.
3. AGAR SS:
Medio de cultivo selectivo y diferencial utilizado para el aislamiento de
Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y
otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.
En el medio de cultivo la pluripeptona y el extracto de carne aportan los
nutrientes para el desarrollo microbiano. Las sales biliares y el verde brillante
Imagen N° 6.
Agar SS con colonias de Salmonella sp.
Fuente: Manurx27 [CC BY-SA 4.
(https://creativecommons.org/licenses/
by- sa/4.0)], from Wikimedia Commons
4. AGAR EMB
El agar EMB es un medio selectivo y diferencial, usado para el aislamiento
de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo, principalmente permite el
desarrollo de todas las especies de la familia enterobacteriaceas.
La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o
sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores
eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas
bacterias Gram positivas. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con
periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras.
Imagen N° 7: Escherichia coli en agar EMB
Imagen N° 8:
comparativo entre microorganismos fermentadores de lactosa y microorganismos no
fermentadores de lactosa.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS ANALÍTICOS :
Crecimiento de colonias con brillo metálico característico de E. coli.
Crecimiento y colonias de color rosado: Microorganismo entérico gram-negativo
lactosa positiva.
Crecimiento y colonias incoloras o ligeramente amarillas: Microorganismo
entérico gram negativo, lactosa negativa.
No crecimiento: Microorganismo gram-positivo o muestra negativa en el
caso que igualmente no se observe crecimiento en un medio enriquecido.
Ejemplos de bacterias no fermentadoras de lactosa son Shigella, Salmonella,
Yersinia, especies de
Proteus y Pseudomonas aeruginosa.
Imagen N° 9:
Tipos de siembra de microorganismos.
IV. RESULTADOS
Explica de acuerdo a las muestras biológicas utilizadas, el crecimiento de
microorganismos en los medios de cultivo utilizados e identifica las
características de los microorganismos fermentadores y no fermentadoras.
Interpretación para agar ENDO
1. Muestras contaminadas:
- Agua de rio : Bacterias Lactosas positivas; Rojas con Brillo metálico; E. Coli;
Mucosas
- Huevo: Negativo
- Agua con tierra: Enterobacteria
- Leche: Bacterias lactosas; E. Coli
Interpretación para agar EMB
2. Muestras contaminadas:
- Agua de rio : E. Coli; Ojo de wey.
- Huevo: Negativo
- Agua con tierra: Hongos; E.coli; Ojo de wey.
- Leche: E. Coli
Interpretación para agar Manitol
3. Muestras contaminadas:
- Secreción garganta: No fermentadoras
- Agua de rio : Fermentadoras; No Fermentadoras
- Leche: E. Coli
- Secreción de la Nariz: No Fermentadoras
Interpretación para agar SS
4. Muestras contaminadas:
- Agua de rio : Salmonella; Proteus; Escherichia coli.
- Agua con tierra: Proteus
- Leche: Proteus
Interpretación para agar Mac Conkey
5. Muestras contaminadas;
Realiza un listado de las Enterobacterias fermentadoras y no fermentadoras
Enterobacterias fermentadoras de lactosa:
- Escherichia coli
- Enterobacter spp.
- Proteus spp.
Enterobacterias no fermentadoras de lactosa:
- Shigella spp.
- Yersinia spp.
Si se observa tanto un cambio de color amarillo como la formación de sulfuro de
hierro negro, esto indica que se está produciendo una fermentación ácida y una
formación de sulfuro de hidrógeno.
Si el color del medio no cambia, significa que las bacterias no pueden fermentar los
azúcares presentes
Es importante tener en cuenta que la interpretación de los resultados en el medio de
cultivo TSI debe realizarse considerando otros factores, como la presencia de gas y la
morfología de las colonias, para identificar correctamente la especie bacteriana.
Tomando como modelo los cuadros explique sus resultados:
1. CARACTERÍSTICAS DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
AGAR MAC CONKEY
ANTES DE
INOCULAR
DEL MEDIO DE
CULTIVO (imágenes
MÉTODO DE
SIEMBRA Y TIEMPO
DE INCUBACIÓN
DESPUÉS DE
INOCULAR EL
MEDIO DE
CULTIVO
INTERPRETACIÓN
CON BASE EN EL
DISEÑO DEL
MEDIO (TOMAR
EN CUENTA
INHIBIDOR,
CONDICIONES E
INDICADORES
CARACTERÍSTICAS DE
CRECIMIENTO DE UN
MICROORGANISMO
EN EL MEDIO, por
ejemplo E. coli
Método aislamiento
por agotamiento de
estrías, tiempo de
incubación 37°C
por 3 días
Se utiliza para el
aislamiento de
bacilos Gram
negativos de fácil
desarrollo,
aerobios y
anaerobios
En este caso presento
fermentadoras como
no fermentadoras y
Salmonella
AGAR ENDO
Método aislamiento
por agotamiento de
estrías, tiempo de
incubación 37°C
por 3 días
Es capaz de
fermentar la
lactosa formarán
colonias de color
rosado fuerte;
siendo
patognomónico
de Escherichia
coli.
En este caso presento;
Bacterias Lactosas
positivas; Rojas con
Brillo metálico; E.
Coli;
AGAR EMB
Método aislamiento
por agotamiento de
estrías, tiempo de
incubación 37°C
por 3 días
El EMB es
selectivo y
diferencial, usado
para el
aislamiento de
bacilos Gram
negativos.
En este caso presento.
Hongos; E.coli; Ojo
de wey; E coli
AGAR SS
Método aislamiento
por agotamiento de
estrías, tiempo de
incubación 37°C
por 3 días
El cultivo es
selectivo y
diferencial
utilizado para el
aislamiento de
Salmonella spp
En el Agar SS
presento Salmonella;
Proteus; Escherichia
coli.
- CARACTERÍSTICAS NUTRICIONALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
AGAR MAC CONKEY
FUENTES
DE
CARBONO
FUENTE
DE
NITRÓGE
NO
FUENTES
DE
ENERGÍA
INDICADORES
DIFERENCIALES
AMORTIGUADOR
ES
DE pH
MECANISMO DE
ACCIÓN
(REDOX/ PH/
COMPLEJOS
Contiene lactosa
como fuente de
carbono principal
la peptona sirve
como la principal
fuente de nitrógeno
La fuente de
energía es la
lactosa y la
peptona.
cambia de color según
el pH del medio, Los
fosfatos y el amonio
actúan como
amortiguadores de pH
en el agar
MacConkey,
ayudando a mantener
un pH adecuado para
el crecimiento
bacteriano
l mecanismo de acción
del agar implica la
fermentación de la
lactosa por bacterias
gramnegativas, la
detección de esta
fermentación a través
de indicadores de pH y
la inhibición selectiva
del crecimiento de
bacterias grampositivas
mediante componentes
como sales biliares y
cristal violeta.
AGAR ENDO
El agar Endo es un
medio de cultivo
selectivo, sus
fuentes de carbono
son; lactosa,
sacarosa, glucosa.
Sus Fuentes de
nitrógeno del agar
Endo son Peptona,
Extracto de
levadura, que son
necesarios para el
metabolismo y
crecimiento
bacteriano
La fuente de
energía del agar
Endo son la lactosa,
la sacarosa y la
glucosa.
El agar Endo utiliza el
rojo de fenol como
indicador de pH.
Inicialmente, el medio
es rojo. Cuando las
bacterias fermentan la
lactosa, producen
ácido, cambiando el
color del medio a
amarillo
El agar Endo utiliza la
fermentación de la
lactosa y el indicador
de pH rojo de fenol
para diferenciar
bacterias basándose en
su capacidad para
fermentar este azúcar.
El medio inicialmente
rojo se vuelve amarillo
en presencia de
Cuestionario:
1. Qué es la lactosa y cuál es su estructura.
La lactosa es un disacárido que se encuentra comúnmente en la leche de mamíferos y es
una fuente importante de energía para los recién nacidos. Químicamente, la lactosa está
formada por la unión de dos monosacáridos: la glucosa y la galactosa. Su fórmula
química es C12H22O11 (Wikipedia, 2024)
La estructura de la lactosa se puede representar de la siguiente manera:
HO HO
H─C─OH HO─C─(CHOH)4─CH2OH
H─C─OH HO
HO─C─(CHOH)4─CH2OH
HO
En esta estructura, el grupo -OH en el carbono 1 de la glucosa se une al grupo -OH en el
carbono 4 de la galactosa mediante un enlace glucosídico β(1→4), lo que resulta en la
formación de la lactosa. La lactosa es hidrolizada en el tracto digestivo por la enzima
lactasa, que rompe el enlace glucosídico, liberando glucosa y galactosa que pueden ser
absorbidas y utilizadas por el cuerpo.
2. Qué es un cultivo puro y cómo se obtiene
Un cultivo puro es una población de microorganismos que contiene solo una especie o tipo de
microorganismo en un medio de cultivo. Esto significa que todas las células presentes en el
cultivo son genéticamente idénticas o muy similares. Obtener un cultivo puro es fundamental
en microbiología para estudiar las características específicas de un microorganismo, ya que
elimina la interferencia de otros organismos que podrían estar presentes en una muestra (luffi,
2018).
Hay varios métodos para obtener un cultivo puro:
- Siembra en placa de agar
En este método, una muestra que contiene múltiples tipos de microorganismos se diluye y se
siembra en placas de agar estériles utilizando técnicas de siembra como la técnica de la
dilución en serie o la técnica del extendido en placa. Después de incubación, las colonias
individuales que crecen en la superficie del agar se seleccionan y se transfieren a placas frescas
para aislarlas aún más.
- Técnicas de dilución en serie
Se diluye la muestra inicial en una serie de tubos de dilución estériles con medio de cultivo
estéril. Luego, se siembran alícuotas de las diluciones en placas de agar. Las diluciones
adecuadas aseguran que las colonias individuales se puedan aislar fácilmente.
- Selección y tinción
En algunos casos, se pueden usar técnicas de tinción selectiva o diferencial para distinguir
entre diferentes tipos de microorganismos en una muestra. Una vez identificados, los
microorganismos de interés se pueden seleccionar y aislar.
Dilución en tubos de ensayo: Similar a la dilución en serie, se pueden diluir las muestras en
tubos de ensayo y luego se siembran alícuotas de las diluciones en placas de agar.
- Separación física
Es una de las bacterias más estudiadas en microbiología debido a su ubicuidad y diversidad de
cepas. Además de ser un indicador común de contaminación fecal en el agua y los alimentos,
ciertas cepas de E. coli son utilizadas en la producción de insulina recombinante y en la
investigación genética (Angeles, 2002).
Salmonella
- Características
Salmonella es un género de bacterias Gram negativas, bacilares y anaerobias facultativas.
Incluye dos especies principales: Salmonella enterica y Salmonella bongori. Muchas cepas de
Salmonella son patógenas y pueden causar enfermedades gastrointestinales, como
salmonelosis, caracterizadas por síntomas como fiebre, diarrea y vómitos.
- Importancia
Salmonella es una de las principales causas de intoxicación alimentaria en todo el mundo. La
prevención de la contaminación por Salmonella en los alimentos es una preocupación
importante para la salud pública y la industria alimentaria (Wikipedia , 2024).
Shigellaq
Características: Shigella es un género de bacterias Gram negativas, bacilares y anaerobias
facultativas. Causa la shigelosis, una enfermedad gastrointestinal que se manifiesta con diarrea
acuosa, fiebre y dolor abdominal. Shigella se transmite principalmente a través del consumo de
alimentos o agua contaminados y la transmisión de persona a persona.
Importancia: La shigelosis es una enfermedad gastrointestinal importante a nivel mundial,
especialmente en áreas con condiciones de saneamiento inadecuadas. El control de la
shigelosis implica medidas de higiene adecuadas y el tratamiento oportuno de los casos
clínicos (Bush, 2022).
Enterobacter
