Mág. Q,F, Andres M. Enriquez Flores Bioquímica UNAS
PRÁCTICA 09: DETERMINACION DE LA ESPECIFICIDAD
DE ENZIMAS AL SUSTRATO.
I. OBJETIVOS
1.1. Determinar la especificidad de diferentes enzimas a su sustrato
correspondiente.
II. PRINCIPIOS TEÓRICOS
Las enzimas son catalizadores específicos. Sin embargo, hay distintos grados
de especificidad. Entre las enzimas poco específicas están las proteasas
digestivas como la quimiotripsina, que rompe los enlaces amida de proteínas
y péptidos. La lactasa es una enzima muy específica, y sólo rompe el enlace
β-glucosídico de la lactosa o de compuestos muy similares. En general, una
enzima no es absolutamente específica y puede actuar sobre una serie más o
menos variada de sustratos semejantes. La enzima actúa con máxima eficacia
sobre el sustrato natural y con menor eficacia sobre los sustratos análogos.
Así, para la sacarosa, la sacarosa es su sustrato natural, mientras que la
maltosa y la isomaltosa son sustratos análogos.
III. MATERIALES Y REACTIVOS
3.1. MUESTRAS:
Harina de soya.
3.2. MATERIALES
Tubos de ensayo; goteros; pipetas de 1 ml, matraces, vasos de pp, cocina
eléctrica, gradilla.
3.3. REACTIVOS:
Urea (1 %); tiourea (1%); acetamida al 1%; fenolftaleína al 0,5%, solución
alcohólica; papel de tornasol.
IV. PROCEDIMIENTO
Fundamento. El método se basa en la determinación del amoníaco que se
forma por la acción de la ureasa de la harina de soya sobre la urea:
El desprendimiento de amoníaco se detecta por el olor y por el cambio de
color de la fenolftaleína y del papel de tornasol rojo.
Comparar la posibilidad de hidrólisis por la ureasa de las sustancias,
semejantes por su estructura con la urea;
Curso de la determinación.
En un tubo colocan 1 mL de urea, en el segundo—tiourea, en el tercero—
acetamida. A cada tubo le agregan aproximadamente 100 mg de harina de
soya y 2 gotas de fenolftaleína, cuidadosamente mezclan con una varilla
de vidrio y dejan reposar a temperatura ambiental. Observan la aparición
del color rosado en los tubos. Detectar la presencia de amoníaco por el olor
y con la ayuda del papel de tornasol, el cual lo colocan sobre el orificio de
los tubos. Comparar los resultados de eliminación de amoníaco en las tres
muestras.
V. RESULTADOS
Presentación del trabajo. Los resultados registrarlos en forma de tabla, hacer
la conclusión sobre la especificidad de la ureasa y su valor práctico.
Enzima
Sustrato
Test del amoníaco
Fenolftaleína
Olor
Papel de tornasol
Ureasa
Ureasa
Ureasa
Urea
Tiourea
Acetamida
VI. CUESTIONARIO
a. Que son los cofactores
b. Defina sitio activo de la enzima
c. Que entiendes por estereoespecificidad de una enzima
VII. CONCLUSIONES
VIII. RECOMENDACIONES
IX. BIBLIOGRAFIA
X. ANEXOS