Es un método de biología molecular que
permite detectar la presencia de una
secuencia de ADN concreta en una mezcla
compleja de este ácido nucleico
SOUTHERN BLOT
Extracción de ADN
Se puede extraer ADN de casi cualquier tejido humano. Las
posibles fuentes de ADN en la escena de un delito incluyen sangre,
semen, tejido de una víctima muerta, células del folículo capilar y
saliva.
Digestión del ADN con una endonucleasa de
restricción
El ADN extraído de la muestra se trata con una endonucleasa de
restricción, que es una enzima que corta el ADN bicatenario en
donde tenga una secuencia característica.
Electroforesis en gel de agarosa
Durante la electroforesis, las moléculas de ADN, que
poseen carga negativa, migran hacia el electrodo positivo. y
como resultado se produce una separación continua de los
fragmentos de ADN de acuerdo con su tamaño.
Preparación de un ensayo de Southern
Tras la electroforesis, las moléculas de ADN separadas se desnaturalizan
mientras permanecen en el gel de agarosa, impregnando éste con una
disolución alcalina. Tras la neutralización de esta, el ADN monocatenario
resultante se transfiere a la superficie de una membrana de nailon,
realizando así una copia o "calco"
Reensayar el resultado del Southern con sondas
adicionales
En un análisis legal de DNA se suelen caracterizar polimorfismos de ADN en varios
cromosomas diferentes. Tras el revelado de una autorradiografía para la primera
sonda, se puede lavar la radiactividad con una disolución a elevada temperatura,
que deja el ADN en su sitio, e hibridarlo con una segunda sonda radiactiva que se
una a un locus diferente.
Hibridación con sonda radioactiva
Una sonda de locus único es una molécula pequeña de ADN o ARN
capaz de hibridar (es decir, de formar un dúplex ADN-ADN o ADN-ARN)
con el ADN de un fragmento de restricción concreto en el ensayo de
Southern.
Detección de los RFLPs mediante
autorradiografía
Las posiciones de hibridación de la sonda radiactiva sobre la
membrana del ensayo de Southern se detectan mediante
autorradiografía.
Correu Antunez Bertha
8HM1
Medicina Genomica
